
NAD激酶(NAD+ Kinase, NADK, EC 2.7.1.23)广泛存在于动物、植物、微生物和细胞中,是目前发现的生物体内唯一能够催化NAD+磷酸化生成NADP+的酶,可催化NAD(H)以ATP或无机多聚磷酸[poly(P)]作为磷酰基供体进行磷酸化反应,生成NADP(H)。因此,NAD激酶在合成NADP(H)以及调节NAD(H)与NADP(H)的平衡上具有重要作用。本试剂盒提供了一种简单的检测方法检测生物样本中NADK的活性水平。其原理是在测定中,样本中存在的NADK催化NAD+磷酸化,生成NADP+;NADP+可被6-磷酸葡萄糖脱氢酶还原为NADPH,NADPH在340nm处有特征吸收峰,通过在340nm下测定NADPH增加速度(吸光值的变化)可反映出NADK活性。



酶标仪或紫外分光光度计(能测340nm处的吸光度)及水浴锅
96孔UV板或微量石英比色皿、可调节式移液枪及枪头
去离子水
匀浆器(如果是组织样本)
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可能的原因有:
1.仪器校准不当。
2.检测波长设置错误。
3.反应孔中有气泡或杂质。
可能的原因有:
1.反应温度过高或过低。
2.试剂浓度不合适。
3.样本中目标物质浓度异常。
1)对照的设置对于测定结果的可靠性影响很大,尤其是待测液中含有与测定原理中拟直接检测的产物一样的物质时。通过设置对照,不仅可以排除本底的影响,而且可以排除其它一些未知的复杂影响,保证测定结果可靠。
(2)首先考虑的是保证测定结果可靠。因此,有些试剂盒只设空白对照,但是有些试剂盒每个样品都设对照。其中后者是根据反应原理,为了排除可能的复杂影响。
关于设置样本对照是否造成浪费。首先必须要保证测定结果可靠,因为如果测定结果不可靠,就不可能得到正确结论,那么所有的研究投入,包括前期的样品培养与处理、购买试剂盒的费用和用户的时间与精力,都会浪费。为此,我们精心权衡,在必要时每个样品都设对照。
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