
过氧化氢(H2O2)是生物体内常见的活性氧分子,是一种活性氧代谢的副产物,主要由超氧化物歧化酶(SOD)和黄嘌呤氧化酶(XO)等催化产生,由过氧化氢酶(CAT)和过氧化物酶(POD)等催化降解。过氧化氢不仅是重要的活性氧之一,也是活性氧相互转化的枢纽。一方面,H2O2可以直接或间接地氧化细胞内核酸, 蛋白质等生物大分子,使细胞膜遭受损害,从而加速细胞的衰老和解体;另一方面,H2O2也是许多氧化应急反应中的关键调节因子。H2O2可以激活 NF-κB 等因子,这些H2O2相关的信号途径和哮喘、炎症性关节炎、动脉硬化以及神经退行性疾病等许多疾病相关。H2O2也和细胞凋亡、细胞增殖等密切相关。本试剂盒提供了一种简单易用的方法,用于测量各种生物样本中H2O2含量。原理是利用H2O2氧化二价铁离子产生三价铁离子,然后和 xylenol orange(二甲酚橙)在特定的溶液中形成紫色的产物,在580nm 的吸光度与H2O2浓度成正比,从而测定H2O2浓度。



酶标仪或可见分光光度计(能测 580nm处的吸光度)
96孔板或微量玻璃比色皿、可调节式移液枪及枪头
恒温箱、离心机、制冰机
去离子水
匀浆器(如果是组织样本)
10kDa的超滤管(用来去除蛋白)
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通常可以按比例缩小,如说明书中是约0.1g组织加1ml提取液,可以等比例缩小,如0.05g组织加0.5ml提取液提取。后续操作不变。此外,对于数量少、酶活性低的样品,一方面可以减少提取液体积,另一方面还可以延长反应时间。
生化试剂盒初一般是采用分光光度法,用分光光度计测量吸光度。微量法是随着酶标仪和微孔板的普及,改用酶标仪和酶标板测量吸光度。除了仪器不同以外,主要差别是反应体系更小,一般不超过250ul,计算公式的系数会有一定变化。
d:由比色皿光径,1cm改为96孔板直径,0.5 cm(也有0.6cm的)
但对于标明只用分光光度法的试剂盒,不建议使用酶标仪进行酶活性测定。非要用酶标仪进行检测,一定要按照说明书将反应体系缩小至250微升左右,加样表中各试剂体积一定要按照比例缩小。不过,因为初研发时是按照分光光度法进行设计和调整的,用户改变测定仪器后,我们不保证能够取得好的结果。
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