
超氧阴离子(O2-)是通过将电子加到氧上而产生的一种短暂的自由基。它是由紫外线、香烟烟雾,环境污染物和γ辐射等环境因素作用形成的,或者是由黄嘌呤氧化酶或 NADPH氧化酶等氧化酶衍生而来的。O2-一旦形成,就会攻击细胞成分并破坏脂质,蛋白质和DNA。这会引发多种疾病,包括癌症,动脉粥样硬化,类风湿性关节炎,糖尿病,肝损害和中枢神经系统疾病。清除超氧阴离子自由基的研究越来越受到重视。本试剂盒提供了一种简单易用的比色法,用于检测各种生物样本超氧阴离子清除能力。其原理是黄嘌呤氧化酶(XO)催化反应提供了超氧阴离子(O2-)。O2-与WST-8染料反应形成水溶性的有色甲臜产物,可以很容易地进行比色定量。样品清除了O2-,因此用于显色反应的O2-较少。通过比色法在OD450nm下测量样品的这种清除能力。



酶标仪或可见分光光度计(能测450nm处的吸光度)
96孔板或微量玻璃比色皿、移液枪及枪头
恒温培养箱、制冰机、低温离心机
去离子水
匀浆器(如果是组织样本)
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生化试剂盒初一般是采用分光光度法,用分光光度计测量吸光度。微量法是随着酶标仪和微孔板的普及,改用酶标仪和酶标板测量吸光度。除了仪器不同以外,主要差别是反应体系更小,一般不超过250ul,计算公式的系数会有一定变化。
d:由比色皿光径,1cm改为96孔板直径,0.5 cm(也有0.6cm的)
但对于标明只用分光光度法的试剂盒,不建议使用酶标仪进行酶活性测定。非要用酶标仪进行检测,一定要按照说明书将反应体系缩小至250微升左右,加样表中各试剂体积一定要按照比例缩小。不过,因为初研发时是按照分光光度法进行设计和调整的,用户改变测定仪器后,我们不保证能够取得好的结果。
1)对照的设置对于测定结果的可靠性影响很大,尤其是待测液中含有与测定原理中拟直接检测的产物一样的物质时。通过设置对照,不仅可以排除本底的影响,而且可以排除其它一些未知的复杂影响,保证测定结果可靠。
(2)首先考虑的是保证测定结果可靠。因此,有些试剂盒只设空白对照,但是有些试剂盒每个样品都设对照。其中后者是根据反应原理,为了排除可能的复杂影响。
关于设置样本对照是否造成浪费。首先必须要保证测定结果可靠,因为如果测定结果不可靠,就不可能得到正确结论,那么所有的研究投入,包括前期的样品培养与处理、购买试剂盒的费用和用户的时间与精力,都会浪费。为此,我们精心权衡,在必要时每个样品都设对照。
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