
谷胱甘肽过氧化物酶(GPX)是谷胱甘肽氧化还原循环中催化还原型谷胱甘肽(GSH)氧化的主要酶之一。GPX不仅能够特异地催化还原型谷胱甘肽与活性氧(ROS)反应,生成氧化型谷胱甘肽GSSG,从而保护生物膜免受ROS的损害,维持细胞的正常功能;而且具有保护肝脏、提高机体免疫力、拮抗有害金属离子对机体的伤害和增加机体抗辐射等能力。GPX的活性中心是硒半胱氨酸,硒是GPX的必需部分,测定GPX的活力可以作为衡量机体硒水平的一项生化指标。本试剂盒提供了一种简单的检测方法,用于检测生物样本,如血清(浆)、动植物组织、细胞、细菌样本中GPX的活性。GPX催化H2O2氧化GSH,产生GSSG;谷胱甘肽还原酶(GR)催化NADPH还原GSSG,再生GSH,同时NADPH氧化生成NADP+;NADPH在340nm有特征吸收峰,而NADP+没有;通过测定340nm光吸收减少速率来计算 GPX 活性。



酶标仪或紫外分光光度计(能测340 nm处的吸光度)
96孔UV微孔板或微量石英比色皿、可调节式移液枪及枪头
恒温箱、制冰机、低温离心机
去离子水
匀浆器(如果是组织样本)
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可能的原因有:
1.仪器校准不当。
2.检测波长设置错误。
3.反应孔中有气泡或杂质。
通常可以按比例缩小,如说明书中是约0.1g组织加1ml提取液,可以等比例缩小,如0.05g组织加0.5ml提取液提取。后续操作不变。此外,对于数量少、酶活性低的样品,一方面可以减少提取液体积,另一方面还可以延长反应时间。
1. 样品尽可能液氮速冻后保存在-80℃冰箱中,以减少酶活性变化。粗酶液提取全程应该保持低温,包括样品称量应该迅速完成,粗酶液提取应该在冰浴中进行,离心应该在4℃左右进行,测定过程中粗酶液应该保存在冰浴中。此外,粗酶液提取后应该尽快完成测定,通常不可以留到第二天测定。
2. 在对样本进行提取时,加完提取液好不要用液氮研磨,而且样本不要反复冻融,这样会破坏酶的活性。冻融会影响蛋白的三级结构,对酶活性有一定影响,对于动植物组织,可以直接研磨,对于细胞或细菌之类的样品,可以使用超声波。
3. 提取要根据不同样本特点进行,原则是提取充分和保持活性。对于有细胞壁的样品,一定要注意破壁方法;对于分布于特定细胞器中的成分,原则上先分离该细胞器,然后再从收集的细胞器中进一步提取需要的成分。对于存在于膜上的成分,要注意如何分离,去垢剂的使用要小心,以避免酶失活。使用超声波破碎,一定要防止温度升高导致失活。特殊样品可以查阅相关文献,参考前人提取方法,或者咨询我们的研发专家。
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