无细胞重组蛋白表达系统和传统的细胞内蛋白质表达系统相比,具有操作方便,可控性高的特点。该系统可 以将转录产物(mRNA)在细胞外的环境中有效的进行翻译。 麦胚无细胞重组蛋白表达系统利用了小麦胚芽提取物来完成上述过程。该细胞提取物含有翻译所需要的“元 件”,包括核糖体、蛋白翻译因子、氨酰 tRNA 合成酶、tRNA 和蛋白质表达所需的其它组分。 在一个标准的 GZL 透析式无细胞重组蛋白表达反应中,用户需要将模板 mRNA(需含有植物翻译元件)、细 胞提取液和其他必须的组分混合在一起放入透析装置内,并放入特定的缓冲液中。缓冲液中的小分子,包括 氨基酸、核苷酸、ATP 和其他因子会与透析装置内的小分子进行交换,促进和提高蛋白质产量。 下图解释了一个透析式无细胞蛋白表达反应的基本设置(Figure 1)。
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解决方案:检查荧光染料和探针质量。或增加探针\染料浓度。
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