FAQ

目前我们的试剂盒检测的种属主要为人，小鼠和大鼠。对于那些命名中带有特定物种名称的试剂盒（如人）是专门针对此物种的。如果说明书中没有指明物种，该试剂盒即在常规哺乳动物种属内是通用的。如果检测物种特殊，建议先跟技术支持确认样本适用性。

对于信号弱的情况，可能有如下10种原因：

Ø  试剂盒超过有效期或者保存温度不当：有效期内使用，在说明书指导下保存；

Ø  试剂、样本在使用前没有平衡至室温：平衡到室温；

Ø  标准品/浓缩液试剂配置前未离心：瓶壁和盖上沾着的试剂离心到底部；

Ø  工作液稀释比例不当：检查稀释步骤和移液器准确度；

Ø  工作液提前配制的时间较久：现用现配；

Ø  移液器计量不准，加入试剂的体积有误：校正移液器，使用正确量程的移液器；

Ø  洗板或者加样过程中，酶标记物受到污染导致活力和效价降低：加样过程勤换枪头，洗板过程中避免液体串孔；

Ø  温育时间/温度未达到实验要求：提前设置好恒温箱的温度，按照说明书准确计时；

Ø  浓缩洗涤液的稀释倍数/洗板次数不符合实验要求；洗涤冲击力太大，浸泡时间太久；

Ø  底物作用时间较短，显色不足：适当延长显色时间。

对于白板现象，可能有如下五种原因：

Ø  试剂盒超过有效期或者保存温度不当；

Ø  不同试剂盒的组分混用或替代；

Ø  洗板或者加样过程中，酶标记物受到污染导致活力和效价降低；

Ø  实验操作中试剂的加样顺序有误：这是常见的原因，比如先加入抗体；

Ø  蒸馏水水质不好、混有其他化学物质或配制的洗涤液pH值偏高/低。

组织样本：组织研磨后，将其-80℃放置1h/液氮放置0.5h，然后置于30℃水浴锅中轻微振荡使其迅速融化，此操作反复1-2次即可；细胞样本：按上述冻融的操作反复2-3次。若为膜蛋白可以适当超声一下，但需要控制好超声的温度和频率。样本中建议提前加入蛋白酶抑制剂。常规推荐：PMSF。

这个问题很多客户来说是比较难的，我们来详细介绍一下。首先用预冷的PBS (0.01M, pH=7.4)冲洗组织，去除残留血液，称重后将组织剪碎。将剪碎的组织与对应体积的PBS(一般按1:9的重量体积比，比如1g的组织样品对应9mL的PBS，具体体积可根据实验需要适当调整，并做好记录。推荐在PBS中加入蛋白酶抑制剂)加入玻璃匀浆器中，在冰上充分匀浆。为了进一步裂解组织细胞，可以对匀浆液进行反复冻融或超声破碎。后将匀浆液于2-8℃，10000×g离心5-10分钟，得到的上清为组织裂解液。

细胞上清具体来说有两种形式，种是细胞培养上清，它是收集细胞培养液后于2-8℃，1000×g离心20分钟，除去杂质及细胞碎片。取上清检测；第二种是细胞裂解物上清，贴壁细胞用冷的PBS轻轻清洗，然后用胰蛋白酶消化，1000×g离心5分钟后收集细胞；悬浮细胞可直接离心收集。收集的细胞用冷的PBS洗涤3次。每10⁶个细胞中加入150-200μL PBS重悬(推荐在PBS中加入蛋白酶抑制剂；若含量很低可减少PBS的体积)并通过反复冻融或超声使细胞破碎。将提取液于2-8℃，1500×g离心10分钟，取上清得到细胞裂解液检测。

样本溶血后，内源性HRP酶以及血红蛋白的类HRP性能杂质会导致ELISA出现不可控的非特异性着色，从而影响检测结果的准确性。如果样本轻微溶血，建议完成标准品孵育步骤后将板条洗涤1-3次再进行后续的操作，以尽可能减少影响。如果溶血严重建议重新收集样本。溶血可由多种理化因素和毒素引起。在体外，如机械性强力振荡、低温冷冻等均可引起溶血。为避免溶血对检测结果的影响，请大家在静脉采血时，回抽压力不宜过大，一次性采血量不宜过少，采集的全血不宜激烈振荡，离心转速不宜过大，收集的全血需尽快处理成血清/血浆，全血不能冻融。若需要麻醉采血，需使用没有溶血作用的麻醉剂，如PMK2009-阿佛丁,即用型三溴乙醇（2%）。

血清是把全血样品于室温放置2小时或2-8℃过夜后于2-8℃，1000×g离心20分钟，取上清即可检测。而血浆样本需要使用抗凝剂，推荐使用EDTA-2Na，样品采集后30分钟内于2-8℃，1000×g离心15分钟，取上清即可得到血浆样本。

代谢试剂盒一般不建议用裂解液处理样本。由于代谢试剂盒的基本原理是基于化学反应，而裂解液中的成分相对比较复杂，可能会有成分对试剂盒的反应产生干扰，所以不建议使用裂解液处理样本。如果您确实想要用，建议先选取几个样本进行预实验，确认没有影响之后再正式实验，以免造成样本和试剂的浪费。

现用现配的试剂都是由试剂本身性质决定的，一般都需在当天内使用完（特殊情况请按照说明书操作）。