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IHC EDTA抗原修复液能否回收利用?
不建议将EDTA抗原修复液回收利用。回收利用的抗原修复液易污染,很可能滋生细菌。EDTA通过螯合金属离子发挥作用,使用后其有效浓度会因结合样本中的金属离子而下降,可能无法保证后续抗原修复效果。反复加热(如高压或微波处理)可能改变溶液pH,影响修复效率。使用过的液体可能携带组织碎片、蛋白质等污染物,导致后续样本背景升高或假阳性结果。
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生化——微量法与分光光度法的区别?
生化试剂盒初一般是采用分光光度法,用分光光度计测量吸光度。微量法是随着酶标仪和微孔板的普及,改用酶标仪和酶标板测量吸光度。除了仪器不同以外,主要差别是反应体系更小,一般不超过250ul,计算公式的系数会有一定变化。
d:由比色皿光径,1cm改为96孔板直径,0.5 cm(也有0.6cm的)
但对于标明只用分光光度法的试剂盒,不建议使用酶标仪进行酶活性测定。非要用酶标仪进行检测,一定要按照说明书将反应体系缩小至250微升左右,加样表中各试剂体积一定要按照比例缩小。不过,因为初研发时是按照分光光度法进行设计和调整的,用户改变测定仪器后,我们不保证能够取得好的结果。
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生化——普通酶标板和UV板的区别?
普通酶标板是用来测定反应产物的光吸收峰波长在可见光范围的生化试剂盒项目的,无法测量反应产物的光吸收峰波长在紫外区域的项目。可见光是电磁波谱中人眼可以感知的部分,可见光谱没有精确的范围;一般人的眼睛可以感知的电磁波的波长在400~760nm之间,但还有一些人能够感知到波长大约在380~780nm之间的电磁波。可见光通常指波长范围为:390nm-780nm的电磁波。注意:我们看到的其实是反射的光,比如ELISA终止后的黄色,黄光波长为580-595nm,但实际测量的450nm是它的补色。
UV板是紫外板,这些微板有一个独特的紫外线透明底部,是测定反应产物的光吸收峰波长在紫外区域的理想耗材。紫外光被划分为A 射线、B 射线和C 射线(简称UVA、UVB 和UVC),波长范围分别为400-315nm,315-280nm,280-190nm
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生化——为什么有些试剂盒每个样本都要设一个对照,这样不是很浪费吗?
1)对照的设置对于测定结果的可靠性影响很大,尤其是待测液中含有与测定原理中拟直接检测的产物一样的物质时。通过设置对照,不仅可以排除本底的影响,而且可以排除其它一些未知的复杂影响,保证测定结果可靠。
(2)首先考虑的是保证测定结果可靠。因此,有些试剂盒只设空白对照,但是有些试剂盒每个样品都设对照。其中后者是根据反应原理,为了排除可能的复杂影响。
关于设置样本对照是否造成浪费。首先必须要保证测定结果可靠,因为如果测定结果不可靠,就不可能得到正确结论,那么所有的研究投入,包括前期的样品培养与处理、购买试剂盒的费用和用户的时间与精力,都会浪费。为此,我们精心权衡,在必要时每个样品都设对照。
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生化——计算时如果选择合适的计算公式?
动物组织及细胞微生物等,可以用质量或者细胞数量计算,也可以建议测蛋白浓度;植物可建议用质量计算;血液或是其他液态样品,可建议用体积计算。如客户购买蛋白含量测定试剂盒,除了说明书强调用考马斯亮蓝法的,通常建议BCA法。动植物组织因为蛋白含量高,在10mg/ml左右,如果用考马斯亮蓝法测定蛋白浓度的话通常需要用PBS缓冲液等稀释液进行稀释。
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生化——谷胱甘肽系列试剂盒注意事项
GSH和GSSG的测定需新鲜样品,长时间放置的样品GSH会被氧化成GSSG,客户购买试剂盒时,可提供一下建议。GR和TrxR是GSH的再生酶,在不同生物中,可能只有GR或TrxR;GPX和TPX是GSH氧化酶,GCL是谷胱甘肽合成酶。GT是谷胱甘肽降解酶。
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生化——抗环血酸系列检测试剂盒注意事项
AsA和DHA的测定好是新鲜样,Gal LDH动物中不含有,是AsA合成的关键酶。AAO和APX是AsA的氧化酶,两者不同之处在于APX需要过氧化氢的参与;MDHAR和DHAR是AsA的再生酶。
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生化——测酶活时样本处理需要注意哪些问题,可以加液氮研磨吗?
1. 样品尽可能液氮速冻后保存在-80℃冰箱中,以减少酶活性变化。粗酶液提取全程应该保持低温,包括样品称量应该迅速完成,粗酶液提取应该在冰浴中进行,离心应该在4℃左右进行,测定过程中粗酶液应该保存在冰浴中。此外,粗酶液提取后应该尽快完成测定,通常不可以留到第二天测定。
2. 在对样本进行提取时,加完提取液好不要用液氮研磨,而且样本不要反复冻融,这样会破坏酶的活性。冻融会影响蛋白的三级结构,对酶活性有一定影响,对于动植物组织,可以直接研磨,对于细胞或细菌之类的样品,可以使用超声波。
3. 提取要根据不同样本特点进行,原则是提取充分和保持活性。对于有细胞壁的样品,一定要注意破壁方法;对于分布于特定细胞器中的成分,原则上先分离该细胞器,然后再从收集的细胞器中进一步提取需要的成分。对于存在于膜上的成分,要注意如何分离,去垢剂的使用要小心,以避免酶失活。使用超声波破碎,一定要防止温度升高导致失活。特殊样品可以查阅相关文献,参考前人提取方法,或者咨询我们的研发专家。
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生化——试剂盒中样本提取时需要0.1g组织,我的样品量不够怎么办?
通常可以按比例缩小,如说明书中是约0.1g组织加1ml提取液,可以等比例缩小,如0.05g组织加0.5ml提取液提取。后续操作不变。此外,对于数量少、酶活性低的样品,一方面可以减少提取液体积,另一方面还可以延长反应时间。