脯氨酸是植物体内适应逆境胁迫的一种重要的渗透调节物质。高等植物中脯氨酸代谢因其初始底物不同,分为谷氨酸( Glu) 和鸟氨酸( Orn) 两条合成途径。鸟氨酸转氨酶(δ-OAT) 是以鸟氨酸为前体合成脯氨酸途径的关键酶,对植物适应逆境胁迫起关键作用。在动物体内,δ-OAT主要参与尿素循环、脯氨酸代谢及氮平衡调节。本试剂盒提供了一种简单的检测方法,用于检测生物样本中OAT的活性。其原理是鸟氨酸和α-酮戊二酸在鸟氨酸转氨酶和NADH作用下发生氨基转移反应生成吡咯啉-5-羧酸(P5C),同时产生NAD。NADH在340 nm处有特征吸收峰,而NAD没有,通过检测340nm处的吸光度的变化可反映出鸟氨酸转氨酶活性的高低。
酶标仪或紫外分光光度计(能测340nm处的吸光度)及水浴锅
96孔UV板或微量石英比色皿、可调节式移液枪及枪头
低温离心机、制冰机
去离子水
匀浆器(如果是组织样本)
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生化试剂盒初一般是采用分光光度法,用分光光度计测量吸光度。微量法是随着酶标仪和微孔板的普及,改用酶标仪和酶标板测量吸光度。除了仪器不同以外,主要差别是反应体系更小,一般不超过250ul,计算公式的系数会有一定变化。
d:由比色皿光径,1cm改为96孔板直径,0.5 cm(也有0.6cm的)
但对于标明只用分光光度法的试剂盒,不建议使用酶标仪进行酶活性测定。非要用酶标仪进行检测,一定要按照说明书将反应体系缩小至250微升左右,加样表中各试剂体积一定要按照比例缩小。不过,因为初研发时是按照分光光度法进行设计和调整的,用户改变测定仪器后,我们不保证能够取得好的结果。
普通酶标板是用来测定反应产物的光吸收峰波长在可见光范围的生化试剂盒项目的,无法测量反应产物的光吸收峰波长在紫外区域的项目。可见光是电磁波谱中人眼可以感知的部分,可见光谱没有精确的范围;一般人的眼睛可以感知的电磁波的波长在400~760nm之间,但还有一些人能够感知到波长大约在380~780nm之间的电磁波。可见光通常指波长范围为:390nm-780nm的电磁波。注意:我们看到的其实是反射的光,比如ELISA终止后的黄色,黄光波长为580-595nm,但实际测量的450nm是它的补色。
UV板是紫外板,这些微板有一个独特的紫外线透明底部,是测定反应产物的光吸收峰波长在紫外区域的理想耗材。紫外光被划分为A 射线、B 射线和C 射线(简称UVA、UVB 和UVC),波长范围分别为400-315nm,315-280nm,280-190nm
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