总胆汁酸(Total Bile Acid, TBA)是胆固醇在肝脏分解代谢的产物,由肝脏合成并分泌,是胆汁的主要成分之一是肝脏分泌到胆汁中大的有机酸。胆汁酸参与脂肪的消化、吸收及胆固醇代谢。当肝细胞损伤或胆道阻塞时,会引起胆汁酸代谢障碍,出现血清胆汁酸增高。检测血液中的总胆汁酸水平(空腹血清)是评估肝胆功能、胆汁代谢状态的重要指标。本试剂盒提供了一种简单的检测方法,用于检测血清(浆)中总胆汁酸(TBA)的含量。其原理是胆汁酸在3α-羟基类固醇脱氢酶(3α-HSD)的催化下以硫代氧化型辅酶I(S-NAD+)为氢受体,脱氢产生3-酮类固醇,使S-NAD+转化为硫代还原型辅酶I(S-NADH)。3-酮类固醇在3α-HSD催化以还原型辅酶I(NADH)为氢供体,产生胆汁酸,通过酶循环反应,不断生成S-NADH,该物质在405 nm处有大吸收峰。在一定的反应时间内,酶循环反应产生的S-NADH与样本中的胆汁酸浓度成正比,据此可以计算出总胆汁酸含量。
酶标仪或可见分光光度计(能测405nm处的吸光度)
恒温箱、96孔板或微量玻璃比色皿、可调节式移液枪及枪头
去离子水
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生化试剂盒初一般是采用分光光度法,用分光光度计测量吸光度。微量法是随着酶标仪和微孔板的普及,改用酶标仪和酶标板测量吸光度。除了仪器不同以外,主要差别是反应体系更小,一般不超过250ul,计算公式的系数会有一定变化。
d:由比色皿光径,1cm改为96孔板直径,0.5 cm(也有0.6cm的)
但对于标明只用分光光度法的试剂盒,不建议使用酶标仪进行酶活性测定。非要用酶标仪进行检测,一定要按照说明书将反应体系缩小至250微升左右,加样表中各试剂体积一定要按照比例缩小。不过,因为初研发时是按照分光光度法进行设计和调整的,用户改变测定仪器后,我们不保证能够取得好的结果。
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