
琼脂糖是琼脂中不带电荷的中性组成成份,提取自琼脂或者含琼脂的海藻,结构上是一种线性聚合物,由β-D-吡喃半乳糖(1-4)连接3,6-脱水α-L-吡喃半乳糖基单位构成。琼脂糖在水中一般加热到90℃以上溶解,温度下降到35-40℃时形成良好的半固体状的凝胶,这是它具有多种用途的主要特征和基础。琼脂糖凝胶性能通常用凝胶强度表示。强度越高,凝胶性能越好。
琼脂糖作为凝胶电泳常用支持物,其纯度会直接影响DNA的分辨能力及电泳结果的清晰度。Agarose为高纯度的琼脂糖,通常配置成浓度为0.5~2%的琼脂糖凝胶,用于分离、鉴定核酸,如DNA鉴定、DNA限制性内切核酸酶图谱制作等。加入核酸荧光染料,使用凝胶成像扫描仪,即可观察电泳结束后的核酸条带。

货号 | PMK0848MU-100 | PMK0848MU-500 |
琼脂糖 Agarose | 100g | 500g |

1. 琼脂糖凝胶制备(以水平电泳琼脂糖凝胶制备为例):
① 根据制胶量及凝胶浓度,量取一定量的电泳缓冲液(TAE或TBE),倒入三角锥形瓶中。
注:制胶缓冲液和电泳缓冲液需一致。
② 准确称量琼脂糖,小心加入上述三角锥形瓶中。在锥形瓶瓶口盖上牛皮纸,置于微波炉中加热熔解。加热至溶液沸腾后,请戴上防热手套,小心晃动锥形瓶,如此重复数次,直至琼脂糖完全溶解。注:琼脂糖熔解过程应采用多次短暂沸腾的方法,避免溶液过热暴沸。同时应保证琼脂糖充分完全熔解,以免造成电泳图像模糊不清。
③ 向充分熔解的琼脂糖里加入核酸染料 。
④ 将琼脂糖溶液倒入制胶模中,然后在适当位置处插上梳子。凝胶厚度一般在3~5mm之间。
⑤ 室温下待胶凝固(大约30min~1h),置于电泳槽中进行电泳。
2. 依据目的核酸片段大小及电泳缓冲液类型,确定所需琼脂糖浓度。
琼脂糖浓度 | 理想线形DNA分辨范围(bp) | |
1x TAE | 1x TBE | |
0.6% | 1200~15000 | 1200~12000 |
0.8% | 1000~10000 | 1000~12000 |
1.0% | 200~10000 | 100~10000 |
1.2% | 100~8000 | 100~5000 |
1.5% | 100~5000 | 50~3000 |
2.0% | 50~3000 | 50~3000 |
2.5% | 50~3000 | 50~2000 |
Pumoke (Wuhan) Biotechnology Co., Ltd 027-87888039/41 www.biopmk.com
质量控制:
凝胶强度(1%凝胶):> 1200 g/cm2;
电渗(EEO):< 0.15;
硫化物:≤ 0.15%;
凝胶温度(1.5%凝胶):35~37℃;
熔胶温度(1.5%凝胶):87~89℃;
水分:≤ 10%;
核酸酶不得检出。

1 、熔胶可能会引起暴沸,需注意防止烫伤。
2 、若使用具有致癌性的荧光染料进行凝胶核酸染色(如溴化乙锭等),请佩戴手套。
3 、配置好的凝胶如不立即使用,请将凝胶泡于电泳缓冲液(TAE或者TBE中)备用,避免凝胶干裂。
4 、该试剂仅用于科研领域,不适用于临床诊断或其他用途。
5 、为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
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可能是因为含有基因组DNA,解决办法有:
1.优化裂解步骤,避免过度裂解;
2.使用碱性裂解法时,确保中和步骤准确;
3.使用柱式提取法,选择性地结合质粒DNA。
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