2×Purple Universal qPCR Master Mix
货号:PMK2005MU
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价格:
120.00
规格:
1ml
5*1mL
货期:
-20℃保存,有效期12个月。
Details
产品详情
  • 产品简介

    2×Purple Universal qPCR Master Mix是使用SYBR Green I嵌合荧光法进行qPCR的2×试剂,颜色为紫红色,具有加样示踪作用。主要成分包括抗体修饰的热启动Fast Taq DNA Polymerase、dNTP、Mg2+、SYBR Green I和针对qPCR优化的适Buffer。本品中添加了耐热性RNase H,可以消除由于cDNA中残存RNA对PCR反应造成的抑制,可提高低拷贝模板的检出率。另外预混液体系中还添加了特殊ROX Reference Dye,适用于不同qPCR仪器,配置反应体系时只需加入引物和模板即可扩增。本产品可在宽广的定量区域内获得良好的标准曲线,实验结果重复性好、可信度高。本产品的独特配方也使整个体系在特异性方面有着很大的提升。

  • 操作步骤

    1. 配制检测试剂

    A.按照下表配置 PCR 反应体系(注:配置多个反应孔时,请为各组分预留 10%的余量,以免移液损失)

    试剂

    20ul体系

    50ul体系

    2×Purple Universal qPCR Master Mix

    10ul

    25ul

    Forward Primer(10μM)

    0.4ul*

    1ul*

    Reverse Primer(10μM)

    0.4ul*

    1ul*

    模板 DNA/cDNA

    X ul**

    X ul**

    DNase-free Water

    As required

    As required

    Total Volume

    Up to 20ul

    Up to 50ul

    *通常每条引物终浓度为0.2μM,也可根据情况在0.1~0.4μM间进行调整。

    **微量体积加样时误差大,建议模板稀释后再加入反应体系中,这样可以有效提高实验的重复性;如模板类型为未稀释 cDNA原液,使用体积不应超过qPCR反应总体积的1/10。

    B. 反应体系配好后,盖好反应盖,充分涡旋混匀,离心,避免产生气泡。

    2. 反应程序设置

    Stage

    步骤

    温度

    时间

    循环数

    Stage1

    预变性/酶激活

    95

    30sec

    1

    Stage2

    变性

    95

    15sec

    40

    退火/延伸/采集信号

    60

    40sec*

    Stage3

    熔解曲线

    仪器默认设置

    1

    标准程序 

    Stage

    步骤

    温度

    时间

    循环数

    Stage1

    预变性/酶激活

    95

    30sec

    1

    Stage2

    变性

    95

    15sec

    40

    退火/延伸/采集信号

    60

    40sec*

    Stage3

    熔解曲线

    仪器默认设置

    1

    快速程序

    Stage

    步骤

    温度

    时间

    循环数

    Stage1

    预变性/酶激活

    95

    30sec

    1

    Stage2

    变性

    95

    2sec

    40

    退火/延伸/采集信号

    60

    20sec*

    Stage3

    熔解曲线

    仪器默认设置

    1

    *延伸时间请根据您使用的Real Time qPCR仪数据采集短时间限制以及PCR产物长度自行调整。

    *模板拷贝数较低时采用标准程序可提高数据的重现性。


  • 注意事项

    1.请于使用前确保产品完全解冻,彻底混匀后短暂离心,置于冰上备用。

    2.多次反复冻融可能会影响产品性能。

    3.本产品中含荧光染料SYBR Green I,使用中应尽量避免强光照射。

    4.本试剂仅用于科研领域,不适用于临床诊断或其他用途。

    5.为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。


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已发表文献
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Product Q&A FAQ
产品问答FAQ
  • Q-PCR实验中扩增效率低

    解决方案:重新设计引物或优化反应体系(如Mg²⁺浓度)。


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