
2×Purple Universal qPCR Master Mix是使用SYBR Green I嵌合荧光法进行qPCR的2×试剂,颜色为紫红色,具有加样示踪作用。主要成分包括抗体修饰的热启动Fast Taq DNA Polymerase、dNTP、Mg2+、SYBR Green I和针对qPCR优化的适Buffer。本品中添加了耐热性RNase H,可以消除由于cDNA中残存RNA对PCR反应造成的抑制,可提高低拷贝模板的检出率。另外预混液体系中还添加了特殊ROX Reference Dye,适用于不同qPCR仪器,配置反应体系时只需加入引物和模板即可扩增。本产品可在宽广的定量区域内获得良好的标准曲线,实验结果重复性好、可信度高。本产品的独特配方也使整个体系在特异性方面有着很大的提升。

1. 配制检测试剂
A.按照下表配置 PCR 反应体系(注:配置多个反应孔时,请为各组分预留 10%的余量,以免移液损失)
试剂 | 20ul体系 | 50ul体系 |
2×Purple Universal qPCR Master Mix | 10ul | 25ul |
Forward Primer(10μM) | 0.4ul* | 1ul* |
Reverse Primer(10μM) | 0.4ul* | 1ul* |
模板 DNA/cDNA | X ul** | X ul** |
DNase-free Water | As required | As required |
Total Volume | Up to 20ul | Up to 50ul |
*通常每条引物终浓度为0.2μM,也可根据情况在0.1~0.4μM间进行调整。
**微量体积加样时误差大,建议模板稀释后再加入反应体系中,这样可以有效提高实验的重复性;如模板类型为未稀释 cDNA原液,使用体积不应超过qPCR反应总体积的1/10。
B. 反应体系配好后,盖好反应盖,充分涡旋混匀,离心,避免产生气泡。
2. 反应程序设置
Stage | 步骤 | 温度 | 时间 | 循环数 |
Stage1 | 预变性/酶激活 | 95℃ | 30sec | 1 |
Stage2 | 变性 | 95℃ | 15sec | 40 |
退火/延伸/采集信号 | 60℃ | 40sec* | ||
Stage3 | 熔解曲线 | 仪器默认设置 | 1 | |
标准程序
Stage | 步骤 | 温度 | 时间 | 循环数 |
Stage1 | 预变性/酶激活 | 95℃ | 30sec | 1 |
Stage2 | 变性 | 95℃ | 15sec | 40 |
退火/延伸/采集信号 | 60℃ | 40sec* | ||
Stage3 | 熔解曲线 | 仪器默认设置 | 1 | |
快速程序
Stage | 步骤 | 温度 | 时间 | 循环数 |
Stage1 | 预变性/酶激活 | 95℃ | 30sec | 1 |
Stage2 | 变性 | 95℃ | 2sec | 40 |
退火/延伸/采集信号 | 60℃ | 20sec* | ||
Stage3 | 熔解曲线 | 仪器默认设置 | 1 | |
*延伸时间请根据您使用的Real Time qPCR仪数据采集短时间限制以及PCR产物长度自行调整。
*模板拷贝数较低时采用标准程序可提高数据的重现性。

1.请于使用前确保产品完全解冻,彻底混匀后短暂离心,置于冰上备用。
2.多次反复冻融可能会影响产品性能。
3.本产品中含荧光染料SYBR Green I,使用中应尽量避免强光照射。
4.本试剂仅用于科研领域,不适用于临床诊断或其他用途。
5.为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
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解决方案:重新设计引物或优化反应体系(如Mg²⁺浓度)。
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