
2×Universal U Probe Master Mix是使用探针法进行qPCR的2×试剂,主要成分包括化学修饰的Hot Start Taq DNA聚合酶、Heat-labile UDG酶和针对qPCR优化的适Buffer。本产品使用dUTP完全替代dTTP,dUTP与Heat-labile UDG组成防污染体系、可有效消除扩增产物污染导致的假阳性结果。本品可在宽广的定量区域内获得良好的标准曲线,结果重复性好、可信度高。

1. 配制检测试剂
试剂 | 体积 | 终浓度 |
2×Universal U Probe Master Mix | 10ul | 1x |
Forward Primer (10μM) | 0.4ul | 200mM* |
Reverse Primer (10μM) | 0.4ul | 200mM* |
TaqMan Probe (10μM) | 0.2ul | 100mM* |
模板 DNA | As required** | / |
DNase-free Water | As required | / |
Total Volume | Up to 20μl | / |
*通常每条引物终浓度为0.2μM,也可以根据情况在100-400nM间进行调整;每条探针浓度根据具体情况在50-200nM间调整。
**微量体积加样时误差大,建议模板稀释后再加入反应体系中,这样可以有效提高实验的重复性。。
2. 反应程序设置
步骤 | 温度 | 时间 | 循环数 |
消化污染 | 37℃ | 2min | 1 |
预变性/酶激活* | 95℃ | 5min | 1 |
变性 | 95℃ | 15sec | 40 |
退火/延伸** | 60℃ | 40sec |
* Hot Start Taq DNA聚合酶激活需要95℃ 5min;
**延伸时间请根据您使用的 Real Time qPCR仪数据采集短时间限制以及PCR产物长度自行调整,如ABI7500至少34sec。

1.请于使用前确保产品完全解冻,彻底混匀后短暂离心,置于冰上备用。
2.为避免样品间交叉污染和气溶胶污染,推荐在超净台或生物安全柜中进行反应体系的配制,并使用带滤芯的吸头。
3.多次反复冻融会影响产品的性能。
4.该试剂仅用于科研领域,不适用于临床诊断或其他用途。
为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
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解决方案:优化引物设计,提高退火温度。或使用探针法(如TaqMan)提高特异性。
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